در كشت بافت توت فرنگي از مريستم هاي نوك گياه،جهت تكثير توت فرني در محيط مصنوعي استفاده ميشود.اين نوع تكثير،براي كشت توت فرنگي هاي تجاري هم قابل استفاده است.
در زيرما به گزارش يك سيستم كشت كارا براي القاكالوس و احيا كردن گياه در برگ توت فرنگي ميپردازيم.
مواد و روش ها:
برگهاي جوان تازه توسعه يافته از رانرهاي توت فرنگي(F.anannasa) هاي برداشته شده را،با Et OH 70% و سديم هيپوكلرايد 2%ضدعفوني سطحي ميكنيم و پس از چندين مرتبه شستشو با آب،برگهاي قطعه قطعه شده را در Murashige-Skoog يا محيط كشت MS ،باتنظيم كننده هاي رشد قرار ميدهيم وبا 2/0 %گلان گام سفت شده و قبل از اتوكلاو كردن،با NaOHدر PH6 تنظيم ميكنيم.
تنظيم كننده هاي رشداستفاده شده: آلفا-نفتالين استيك اسيد(NAA) .
2،4-دي كلروفنوكسي استيك اسيد(2-4-D) براي اكسين.
6-بنزيل-امينوپورين (BA) براي سايتوكينين هستند.
NAA يا 2-4-D باBA در غلظت مخصوص، مخلوط شده و به محيط كشت MS اضافه شده است .
بطريهاي كشت بطور محكم بوسيله ورقه الومينيومي و پارافين،مهرو موم ميشوندو در دماي 26 درجه سانتيگراد و درزير يك شدت روشنايي ثابت 4000Lux كشت داده ميشوند تا زمانيكهبعضي از تغييرات مورفولوژيكي در تكه هاي گياه يا كالوس هاي وادار به رشد شده ايجاد شود.(30تا40 روز)
نتايج و تشريح مطالب:
خلاصه تاثير تنطيم كنده هاي رشددر القا كالوس ،رشد و تفكيك القا فعالانه ي رشد بافتهاي كالوس در بسياري از تركيبات NAA و BA مشاهده گرديده بود وبيشترين عامل مخصوصا زمانيكه برگهاي كشت دهده شده با 1 NAA mg/lوBA كشت داده شد،ديده شدند.
وقتي كه از غلظتهاي بالاتر (2/5-3 mg/l) NAAاستفاده شد،هم بافتهاي كالوس و هم leaf-explantsاغلب اوغات قهوه اي شده ودر مرحله بعدي ،رشدبافتهاي كالوس متوقف شد.
با مقدار كمتر غلظت تنظيم كنندههاي رشد،بافتهاي كالوس وادار به قهوه اي شدن ،شدند امارشد آنها قوي وشديدبود وبيشتر،ريشه هاي نابجا از بافتهاي كالوس 20-30روز بعداز دوره نهفتگي بوجود آمدند.
در هيچ تركيب NAAو BA ،اگرچه ساختمان شاخه از بافتهاي كالوس قابل مشاهده نبود،همان زمانيكه بافتها ازمحيط تكثير قطع شده بودند و براي چندين مرتبه در فاصله دو هفته،كشت دوم انجام شد.
زمانيكه NAA با 2-4-D جايگزين شد،شكل شاخه باموفقيت مشاهده شد.
در نتيجه آنها،2,4-D و BAبراي تمايز شاخه ها از بافت ميوه مفيد بود.در مطالعات امروز،نويسنده،همچنين تاثيرهاي 3-ايندول استيك اسيد (IAA) و كينيتين(K) در اضافه كردن به تنظيم كنده هاي فوق الذكر راآزمايش كرد.در همه تركيبات (K-2,4-D , K-BAP ,IAA-K ,IAA) واگرچه القا كالوس كمياب ونادر بود،اگر وادار ميكرد،خيلي كند بود.
در سيستم حاضر ،ماقادر به وليد يك منبع كارامد براي توليد گياه توسط كشت مريستم برگ و سپس كالوس شديم.
 از فن كشت بافت براي توليد تجاري گياهان عاري از پاتو‍‍‍‍‍‍‍‍‍ژن و به منظورحفاظت از گياهان كمياب و در حال انقراض استفاده ميشود.در اين روش از تكنيك هايي مثلكشت مريستم و ريز نمونه ها در محيط آزمايشگاهي (درون شيشه)استفاده مي شود.گياه Anoectochilus formosanus يك گياه دارويي چند ساله ي كند رشد و بومي تايوان كه بوسيله ي بذر تكثير مي شود ولي نشاهاي آن حدود 3-2 سال طول مي كشد تا بالغ شوند و توليد بذر كنند. استفاده از گونه هاي اين گياه براي تكثير به علت حساسيت فوق العاده زيادآن به پوسيدگي ساقه و ريزوم قارچ Fusarium oxysporum كاري مشكل است.هم اكنون روشهايي به منظور توليد انبوه اين گياه در شيشه با استفاده از جوانه راسي و ريز نمونه ي گرهي معرفي شده است.در اين روش از گياهان 2 ساله ي سالم به عنوان منبع توليد ريزنمونه استفاده مي شود.زماني كه گياه جوان حدود 4-2 سانتي متر رشد كرد در محيط كشت مايع حاوي BAوNAA قرار داده مي شود و بعد از 2 ماه كشت،جوانه هاي محوري شروع به رشد كرده و ريشه دارمي شوند و آنها را دوباره در محيط كشت ديگري كشت داده و به مدت 2 ماه محافظت شده، با رشدمناسب ريزوم ها،آنها را با آب شسير شسته و بعد به سبد هاي پلاستيكي حاوي پيت ماس انتقال مي دهند.بيش از 95% گياهان بعد از كاشته شدن در گلدان سالم جان سالم به در بردند.از اين روش در تايوان به منظور توليد تجاري گياهان عاري از بيماري استفاده مي شود.
نظرات شما عزیزان:
zahra 
ساعت20:44---26 اسفند 1391
|
خبرنامه وب سایت:
آمار
وب سایت:
شرح روش عملي كشت مريستم در كشت بافت توت فرنگي
نويسنده: 
